本生一秒鐘帶您了解pcr耗材，八聯(lián)管、pcr96孔板的選擇!

　　我們來(lái)聊聊PCR實(shí)驗中很關(guān)鍵的要素——耗材。作為PCR?？?，了解PCR耗材相關(guān)的特性和術(shù)語(yǔ)是有必要的。

　　市面上的PCR耗材有很多，各種品牌、規格、顏色等，讓人眼花繚亂。我們來(lái)慢慢認識它。材質(zhì)PCR耗材的原材料通常是聚丙烯。它是一種很好的耐熱惰性物質(zhì)(使用溫度范圍為-30～140℃)，能夠承受PCR反應熱循環(huán)過(guò)程中的熱能變化，很好地封閉和保護PCR反應體系中的物質(zhì)。

　　顏色常見(jiàn)的有白管和透明管。在傳統PCR實(shí)驗中，兩者沒(méi)有區別。但是，在相同的熒光定量/qPCR實(shí)驗中，對于頂端信號讀取的qPCR儀器(在管的上方采集熒光信號)來(lái)說(shuō)，白管的靈敏度和一致性相對更高(下圖A和B)。這是為什么呢?

　　與透明管相比，A 白管得到的Ct值更低;B 白管得到的重復性更好

　　qPCR的核心數據是Ct值，而熒光信號是Ct值計算的數據來(lái)源，所以管內的熒光能否完好地傳遞至檢測器是至關(guān)重要的。白色的管壁能夠阻止熒光穿過(guò)管壁和折射(下圖A)，進(jìn)而防止熒光傳至加熱模塊(放管子的金屬孔壁)，被模塊吸收或發(fā)生不一致反射等情況。相比于透明管，在白管的頂端能夠采集到更強，更聚焦的熒光信號(下圖B)。

　　A 透明管和白管中熒光信號走向;B 分別加入等量熒光素后，熒光強度對比

　　So，假如你正在使用的是頂讀qPCR儀，那么安利一下，不妨用白管試試哦~

　　質(zhì)量(是否干凈)這里強調一下耗材質(zhì)量的重要性。qPCR耗材必須保證沒(méi)有污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細菌和DNA酶，但不能去除灰塵和DNA殘留，它們可能會(huì )抑制PCR反應或產(chǎn)生非特異性擴增。物質(zhì)是具有吸光度的，即便是很小的污染物也會(huì )吸收反應體系中的熒光，影響熒光信號的采集。用一個(gè)夸張版的實(shí)驗來(lái)演示一下雜質(zhì)污染對實(shí)驗的影響，如下圖所示，在八聯(lián)排的一個(gè)反應孔中放入一粒雜質(zhì)，不出所料，擴增結果曲線(xiàn)出現了顯著(zhù)的異常。

　　↑ 8復孔重復性反應結果，左邊孔中的雜質(zhì)讓曲線(xiàn)“跑偏"

　　Tips 注意不要讓耗材長(cháng)期暴露在空氣中，取出耗材后，一定要快速封好包裝袋，避免用裸手接觸。有條件的話(huà)，可在超凈臺中操作。容量/尺寸/通量

　　容量決定了可加樣的多少(反應體積)。加樣過(guò)多會(huì )導致熱傳導效率下降，溢出或交叉污染;而加樣不足會(huì )引起樣品蒸發(fā)損耗。qPCR儀的加熱模塊也會(huì )決定可適配的耗材和適用的反應體系大小。通量很容易理解，就是單次實(shí)驗能上多少個(gè)樣品。常見(jiàn)的容量和通量規格如下表所示：

　　單管/八聯(lián)排0.2mL、0.1mL

　　96孔板0.2mL、0.1mL

　　384孔板0.02mL

　　容量規格也常用標準和低容量來(lái)區分，如下圖所示。low profile(低容)耗材的高度更低，這種短小的設計減少了反應體系上方的空間(“死體積"——無(wú)用部分)，降低熱循環(huán)過(guò)程中的蒸發(fā)影響，同時(shí)能夠讓加熱模塊更大程度地將其包裹，提高熱傳導效率。因此，低容管也被稱(chēng)為“快速"管或板。

　　Tips 常見(jiàn)的反應體積一般為20 µL，推薦使用0.1 mL或low profile的低容反應管。管壁厚度

　　PCR耗材的管壁厚度要均一，才能提供一致的熱傳導。超薄管壁較標準版薄50%，可進(jìn)一步減少熱屏障，帶來(lái)更快更好的反應效果。當然，建議選超薄的。

　　透明度qPCR的管蓋和封膜需要具有很高的光學(xué)透性，確保的熒光信號的穿透和傳遞，減少失真(針對頂讀qPCR儀)。管壁的透明度越高反倒會(huì )影響實(shí)驗結果，理由在前面解釋過(guò)。傳統PCR可忽略此特點(diǎn)。裙邊PCR板的裙邊指的是板的周?chē)由觳糠?。額.......這個(gè)裙邊作用是在構建反應體系時(shí)為移液過(guò)程提供穩定性支撐，以及結合自動(dòng)化工作站時(shí)提供機械強度和抓手。常見(jiàn)的有三種：無(wú)裙邊、半裙邊和全裙邊(對應下圖A、B、C)。

　　Tips 簡(jiǎn)單理解就是，裙邊的意義更多在于為工業(yè)化、自動(dòng)化批量處理提供便利，與機械臂的結合。在常規科研實(shí)驗室中可能不太需要，使用無(wú)裙邊板即可。

　　封板膜

　　PCR封板膜由透明塑料或鋁箔制成。黏性透明薄膜比較常見(jiàn)，適配于96或384孔板，要有足夠好的光透性?？梢栽诜饽r(shí)用個(gè)小卡片把孔周?chē)哪壕o，避免漏氣等現象。實(shí)驗室里的貼膜boy們應該很熟悉了吧?？梢院?jiǎn)單理解為......

　　黏性鋁膜可能比較少見(jiàn)，盡管不適合qPCR，但對于光敏樣品還是合適的耗材，由于可以穿刺，便于PCR中樣品轉移。(適用于傳統PCR)

　　總結：

　　耗材作為PCR體系的載體，對提高實(shí)驗數據質(zhì)量是非常重要的。希望本分享能夠讓你了解PCR耗材的一些小知識。

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