本生焦點(diǎn) ELISA試驗操作失利的主要原因

　　我們知道，ELISA測定中影響要素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢驗中除正常反響外，有時(shí)?？梢?jiàn)到一些錯誤結果(即假陽(yáng)性或假陰性)，那么致使試驗不成功的主要原因有哪些咧?

　　，標本的影響：溶血標本及混有紅細胞的血清選用ELISA法檢測易發(fā)生假陽(yáng)性?；蛟S是溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，在洗刷過(guò)程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍色，發(fā)生假陽(yáng)性。所以嚴重溶血標本禁用。

　　第二，標本受細菌污染：因菌體中或許含有內源性辣根過(guò)氧化物酶，因而，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測定結果。

　　第三，標本保存不妥：在冰箱中保存過(guò)久的標本，在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、構成假陽(yáng)性;為克服上述攪擾，ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮收集;如不能當即測定，5d內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時(shí)應輕柔，不行激烈振動(dòng)。

　　第四，標本凝結不全：在工作中，有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測，常在血液還未開(kāi)始凝結時(shí)即強行離心別離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過(guò)程中能夠構成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易構成假陽(yáng)性結果;因而血液標本收集后有必要使其充分凝結后再別離血清。

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