蛋白質(zhì)電泳分子量標準試劑實(shí)驗注意事項

　　1) 由于細胞凋亡是一個(gè)快速的過(guò)程，建議樣品在染色后1小時(shí)之內進(jìn)行分析。

　　2) 對于貼壁細胞，消化是一個(gè)關(guān)鍵步驟。貼壁細胞誘導細胞凋亡時(shí)如有漂浮細胞，需收集漂浮細胞和貼壁細胞后合并染色。處理貼壁細胞時(shí)要小心操作，盡量避免人為的損傷細胞。胰酶消化時(shí)間過(guò)短，細胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細胞膜的損傷， 蛋白質(zhì)電泳分子量標準試劑PI攝入過(guò)多;消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，細胞膜同樣易造成損傷，甚至會(huì )影響細胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC的結合。消化時(shí)將胰酶鋪滿(mǎn)孔板底后，輕搖時(shí)胰酶與細胞充分接觸，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時(shí)間，待細胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA，EDTA會(huì )影響Annexin V與PS的結合。

　　3) 實(shí)驗中如需要固定細胞，比如在檢測凋亡的同時(shí)檢測細胞周期，只能選用Annexin V-FITC，而不能選用Annexin V-EGFP，因為在固定過(guò)程中EGFP會(huì )變性導致喪失激發(fā)熒光的能力。固定前需要先將細胞與Annexin V-FITC進(jìn)行孵育，并用binding buffer洗掉未結合的Annexin V-FITC。因為固定過(guò)程中細胞通透性增加會(huì )產(chǎn)生細胞碎片，可以和Annexin V結合，對結果產(chǎn)生干擾。

　　4) 如果樣品來(lái)源于血液，請務(wù)必除去血液中的血小板。 蛋白質(zhì)電泳分子量標準試劑因為血小板含有PS，能與Annexin V結合，從而干擾實(shí)驗結果?？梢允褂煤?strong>EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。

　　5) 試劑在開(kāi)蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

　　6) Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光。

　　注：以上資料僅供參考！

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