小鼠C反應蛋白(CRP)ELISA試劑盒

　　小鼠C反應蛋白(CRP)ELISA試劑盒用于測定小鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中 C-反應蛋白(CRP)的含量。

　　一、產(chǎn)品說(shuō)明

　　規格：96T、48T

　　試劑盒性能：

　　1.樣品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數 R 值為 0.95 以上。

　　2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于 10%和 10% 。

　　檢測范圍：

　　7.5 ng/mL - 240 ng/mL

　　靈敏度：

　　最小低檢測濃度小于 1.0 ng/mL

　　保存條件及有效期：

　　1.試劑盒保存： 2-8℃。

　　2.有效期： 6 個(gè)月

　　二、實(shí)驗原理：

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠 C-反應蛋白(CRP)水平。用純化的小鼠 C-反應蛋白(CRP)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入小鼠 C-反應蛋白(CRP)，再與 HRP 標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng) 過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠 C-反應蛋白(CRP)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值)，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中小鼠 C-反應蛋白(CRP)含量。

　　三、小鼠C反應蛋白(CRP)ELISA檢測試劑盒組成：

　　注：標準品濃度依次為：240、120、60、30、15、0 ng/mL.

　　四、樣本處理及要求：

　　1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收 集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。

　　2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次 離心。

　　3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò) 程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

　　4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液， 細胞濃度達到 100 萬(wàn)/ml 左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離 心。

　　5. 組織標本：切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

　　6. 標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

　　7. 不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

　　五、操作步驟

　　1. 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL;。

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3. 加酶：每孔加入酶標試劑 100μl，空白孔除外。

　　4. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。

　　5. 配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。

　　6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。

　　7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘.

　　8. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。

　　9. 測定：以空白孔調零，450nm 波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

　　六、注意事項：

　　1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2. 濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

　　3. 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

　　4. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定，計算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6. 底物請避光保存。

　　7. 嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

　　8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　9. 本試劑不同批號組分不得混用。

　　10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準。

　　注：本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗，凡購買(mǎi)本公司ELISA試劑盒的客戶(hù)，均可享受免費的ELISA代測服務(wù)。詳情可詢(xún)我司在線(xiàn)客服和經(jīng)理!

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