Matrix標準型含酚紅基質(zhì)膠

　　基底膜是動(dòng)物體內上皮細胞基底面的一層基質(zhì)膜。LYNJUNE®Matrix是從Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤組織提取的基底膜成分，所形成的基質(zhì)膠。該基質(zhì)膠主要成分為laminin，collagen IV，heparan sulfate proteoglycans(Kleinman et al. 1986)。同時(shí)，該基質(zhì)膠也包含多種生長(cháng)因子，例如表皮生長(cháng)因子EFG，血小板衍生生長(cháng)因子PDGF，神經(jīng)生長(cháng)因子NGF，堿性成纖維細胞生長(cháng)因子FGF-2，乙型轉化生長(cháng)因子TGF-beta和胰島素樣生長(cháng)因子ILGF(Vukicevic et al. 1992)。

　　產(chǎn)品來(lái)源：

　　Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤基底膜成分

　　產(chǎn)品儲存：

　　建議您融化后先按照單次用量進(jìn)行分裝，保存-20°C冰箱，有效期2年。

　　產(chǎn)品性質(zhì)：

　　本品在4°C條件下為液態(tài)，但在加熱到37°C時(shí)呈凝膠狀態(tài)?；|(zhì)膠凝固后，重新放回4°C過(guò)夜，基質(zhì)膠可再次液化。

　　注意事項：

　　該基質(zhì)膠在溫度高于10°C時(shí)就會(huì )開(kāi)始凝固成膠，所以盡量在冰上操作基質(zhì)膠。類(lèi)器官傳代時(shí)，如果為了避免酶對類(lèi)器官造成影響，可直接用4°C預冷的基礎培養基對基質(zhì)膠進(jìn)行緩慢吹打，即可將類(lèi)器官從基質(zhì)膠中釋放出來(lái)。

　　產(chǎn)品應用：

　　本品適用于類(lèi)器官生長(cháng)、分化、代謝和毒理學(xué)研究，體內和體外血管生成實(shí)驗。

　　操作方法：

　　一、腫瘤類(lèi)器官藥敏實(shí)驗(操作所需時(shí)間為2小時(shí))

　　1.將擴增好足夠量的腫瘤類(lèi)器官(實(shí)驗組)以及正常類(lèi)器官(對照組)用4°C預冷的基礎培養基進(jìn)行重懸，緩慢機械吹打，促進(jìn)膠液化溶解，并保持類(lèi)器官結構完整(可用于懸浮培養于有5%基質(zhì)膠溶液的基質(zhì)膠表面)(Guillen et al. 2022)?；蛘咄ㄟ^(guò)TryplE酶消化獲得單細胞懸液。

　　2.離心收集類(lèi)器官細胞，并進(jìn)行細胞計數。

　　3.加入LYNJUNE®基質(zhì)膠原液，與細胞進(jìn)行混勻。

　　4.將細胞與膠的混合物，通過(guò)排槍加入37°C預熱過(guò)的96孔板，或者384孔板，立即將孔板放入培養箱。

　　5.大約10min后，LYNJUNE®基質(zhì)膠將凝固，加入相應體積的類(lèi)器官培養液進(jìn)行培養。

　　6.類(lèi)器官形成后(如果是機械吹打，類(lèi)器官將在傳代24h后就會(huì )形成;如果是酶消化，類(lèi)器官會(huì )在3-5天后形成)，每個(gè)孔分別加入含有PI染料以及不同種類(lèi)、不同濃度的待篩選的抗腫瘤藥物。

　　7.用高內涵顯微鏡上進(jìn)行活細胞成像，測定腫瘤類(lèi)器官對各種藥物的敏感性。

　　二、血管生成實(shí)驗(以永生化HUVEC細胞系為例，操作所需時(shí)間為1小時(shí))

　　1.將培養基換成饑餓細胞用培養基：加入含0.2% FBS，2mM L-gaxa，1mM丙酮酸鈉，100U/ml青ms和100µg/ml鏈ms的DMEM培養基培養24小時(shí)。

　　2.將LYNJUNE®基質(zhì)膠均勻鋪滿(mǎn)96孔板底。注意：槍頭需提前預冷半小時(shí)。盡量在冰上操作，避免基質(zhì)膠過(guò)早固化，避免氣泡產(chǎn)生。

　　3.將96孔板在細胞培養箱孵育30min，固化基質(zhì)膠。

　　4.消化HUVEC細胞，并計數。

　　5.將200µL的HUVEC細胞懸液(含5X10^4個(gè)細胞)加于含基質(zhì)膠的96孔板中。將96孔板放于培養箱。

　　6.血管樣網(wǎng)絡(luò )結構將于3至12小時(shí)間形成。

　　7.在血管網(wǎng)絡(luò )形成時(shí)，小心去除培養基，并用加入含活細胞染料1/1000 Calcein AM(綠色)的培養基進(jìn)行染色，并用顯微鏡進(jìn)行拍照記錄。

　　三、神經(jīng)軸突3D生長(cháng)實(shí)驗(以大鼠胚胎神經(jīng)干細胞為例，操作所需時(shí)間為2小時(shí))

　　1.取孕期12-15天的大鼠胚胎，用眼科剪和眼科分離出大腦皮層于4°C預冷的DMEM培養基中。

　　2.用吸管輕緩吹打，然后用70µm濾網(wǎng)過(guò)來(lái)，獲得單細胞懸液，并進(jìn)行細胞計數。

　　3.離心(300g，3min)，棄上清。將細胞與LYNJUNE®基質(zhì)膠進(jìn)行混合，然后將基質(zhì)膠混合物滴加在24孔板中，每孔50µl。

　　4.將24孔板放于培養箱，大約10min后，LYNJUNE®基質(zhì)膠將凝固。加入1mL神經(jīng)元分化培養基：Neurobasal medium，2% B27, 2mM L-glutamine，5%FBS，20ng/mL EGF和20ng/mL bFGF，100U/mL penicillin和100 µg/mL streptomycin。第二天開(kāi)始，就能觀(guān)察到有明顯的神經(jīng)軸突生長(cháng)。

　　5.在第7天可觀(guān)察到大量的神經(jīng)突(Neurite)長(cháng)出。

　　僅 供 研 究 用 途 ，不 得 用 于 診 斷 或 治 療 程 序 。

　　Matrix標準型含酚紅基質(zhì)膠本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。