人總雙微基因2(MDM2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：

96T

6pg/ml-200pg/ml

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中總雙微基因 2(MDM2)含量。

實(shí)驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人總雙微基因 2(MDM2)水平。用純化的人總雙微基因  2(MDM2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入總雙微基因 2(MDM2)，再與 HRP 標記的總雙微基因  2(MDM2)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP  酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總雙微基因 2(MDM2)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD  值)，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中人總雙微基因 2(MDM2)濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(400pg/ml) 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1 份

5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)

標本要求

1.標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能

馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

200pg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

100pg/ml 4 號標準品 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

50pg/ml 3 號標準品 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

25pg/ml 2 號標準品 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

12.5pg/ml 1 號標準品 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣  50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡  量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。

11. 測定：以空白孔調零，450nm 波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

操作程序總結：

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的 OD 值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD  值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數， 即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值

大于標準品孔孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(

n 倍)后再測定，計 算時(shí)請乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存：;2-8℃。

2.有效期：6 個(gè)月

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