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實(shí)驗中微孔板使用常見(jiàn)到的一些問(wèn)題匯總
Q1:如何選擇微孔板的顏色?
1)熒光檢測
黑色微孔板能吸收光,因此可抑制自發(fā)熒光的影響,適用于 GFP、熒光素、Cy3 和 Cy5 等 短半衰期(納秒~微秒)熒光檢測。對于使用半衰期較長(cháng)(微秒~毫秒)的鑭系元素螯合物 等的檢測,可使用時(shí)間分辨熒光檢測法來(lái)避免自發(fā)熒光影響,通常推薦使用白色微孔板, 但如果檢測中存在較大的交叉干擾,則需要使用黑色微孔板。
2)發(fā)光檢測
通常使用光反射效率較高的白色微孔板。如需避免交叉干擾,可使用灰白色 、灰色或黑色 微孔板。此外,磷光(指微孔板等物質(zhì)受到熒光燈等光的照射后蓄存發(fā)光的現象)也是造 成背景增強的原因之一。黑色微孔板可抑制這種現象帶來(lái)的影響。對于白色微孔板,在檢 測前將其遮光約 10 分鐘以達到暗適應,即可降低磷光影響。
Q2:關(guān)于邊緣效應的問(wèn)題
關(guān)于邊緣效應的類(lèi)型與解決方案的信息如下:
?、贉囟忍荻龋嚎赏ㄟ^(guò)在測定前將微孔板的溫度預先調整為與檢測儀相同的溫度來(lái)解決。
?、谡舭l(fā):可使用板蓋或密封膜來(lái)防止蒸發(fā)。此外,將培養箱內的濕度設到 100%附近也有幫 助。
?、坩槍毎麑?shí)驗中出現的邊緣效應,有報告稱(chēng)在將微孔板放入 37℃的培養箱前,先將微孔 板置于室溫下預孵育 1 小時(shí)可有助于細胞均勻粘附。
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