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操作ELISA試劑盒的實(shí)驗步驟及常見(jiàn)問(wèn)題匯總
ELISA試劑盒實(shí)驗操作步驟的詳細說(shuō)明:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開(kāi)封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn),做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時(shí)請*后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
ELISA試劑盒實(shí)驗操作的常見(jiàn)問(wèn)題。
一、一次ELISA實(shí)驗需要多長(cháng)時(shí)間?
雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗需要3.5-4小時(shí),競爭ELISA法一次實(shí)驗需要2-2.5小時(shí)。
二、血清樣本如何處理?
全血標本于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。
三、血漿樣本如何處理?
建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,于1000×g離心15分鐘,仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。
四、細胞上清液樣本如何處理?
檢測分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細收集上清。
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