本生快訊——ELISA試劑盒規范曲線(xiàn)的制作關(guān)鍵簡(jiǎn)述

　　很多試劑檢查都涉及到規范曲線(xiàn)的疑問(wèn)，ELISA試劑盒規范曲線(xiàn)做的好與壞會(huì )直接影響到試驗的成果，乃至關(guān)系到試驗的成敗，那么究竟怎么繪制或制造規范曲線(xiàn)呢?下面本生技術(shù)小編詳解如下：

　　一、做規范曲線(xiàn)樣品檢查時(shí)有幾個(gè)疑問(wèn)需要注意

　　1、樣品的濃度等目標是依據規范曲線(xiàn)計算出來(lái)的，所以首先要把做規范曲線(xiàn)看作是比做正式試驗還要主要的一件事，不然后邊的試驗成果無(wú)從談起。

　　2、設置規范曲線(xiàn)樣品的規范濃度規模要有一個(gè)對比大的跨度，而且要能包括你所要檢查試驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在規范曲線(xiàn)濃度規模以?xún)?，人ELISA試劑盒包括上限和下限。而對于呈S型的規范曲線(xiàn)，盡量要使試驗樣品的濃度在中心斜度最陡段，即曲線(xiàn)簡(jiǎn)直成直線(xiàn)的規模內。

　　3、選用倍比稀釋法制造規范曲線(xiàn)中的規范樣品濃度，這么就能夠確保規范樣品的濃度不會(huì )出現較大的違背。

　　4、檢查規范樣品時(shí)，應按濃度遞加順序進(jìn)行，以削減高濃度對低濃度的影響。

　　5、規范曲線(xiàn)的樣品數通常為7個(gè)點(diǎn)，但最少要確保有5個(gè)點(diǎn)。

　　6、做出的規范曲線(xiàn)相數因試驗要求不一樣而有所變化，但通常來(lái)說(shuō)，相數R最少要大于0.98，對于有些試驗，最少要0.99乃至是0.999.

　　二、ELISA試劑盒挑選啥方程去擬合

　　在S曲線(xiàn)的低濃度部分能夠用乘冪方程的擬合，中低濃度部分能夠用直線(xiàn)方程，中心部分可用對數方程，而中后段可用四參數。免疫檢查時(shí)標準點(diǎn)(能夠是倍比稀釋的，也能夠不是)濃度假設和相應的吸光度(OD)值假設能夠出現直線(xiàn)當然是最抱負的了，這時(shí)能夠經(jīng)過(guò)EXELL等利便的取得擬合曲線(xiàn)，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。

　　對于標準曲線(xiàn)的擬合辦法，直線(xiàn)、二次曲線(xiàn)、三次曲線(xiàn)、指數、對數等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反響中的曲線(xiàn)擬合，但都只合用于曲線(xiàn)的一部分，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中心一段，而Logistic曲線(xiàn)則對曲線(xiàn)的悉數都有較好的合用性。在一個(gè)長(cháng)的區間內，Logistic應當都能擬合得較為抱負。假設用來(lái)定量，S形曲線(xiàn)的中心段(較陡處)是對比好的，而兩真個(gè)平整部分計算誤差會(huì )大，有時(shí)乃至會(huì )很大。用于免疫檢查的所謂“標準曲線(xiàn)"真實(shí)稱(chēng)為擬合曲線(xiàn)對比適宜?，F在國際上最盛行的免疫檢查擬合辦法是“四參數邏輯擬合"，用這種擬合辦法通常能夠對比的反映濃度和吸光度的曲線(xiàn)，從而進(jìn)一步對比的取得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。但咱們做免疫檢查很少有時(shí)候能夠有這么抱負的情況，標品濃度和相應OD值通常是"S"型的曲線(xiàn)，這時(shí)就不能用直線(xiàn)擬合的辦法了，而對擬合辦法進(jìn)行挑選即是必要的了。

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