胎牛血清使用中的會(huì )遇到哪些問(wèn)題

1、 如何儲存和解凍血清才不會(huì )使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。

長(cháng)時(shí)間儲存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。

我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會(huì )影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因為沉淀會(huì )堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì )再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì )自然消失。

3、實(shí)驗室如何選擇適合的血清?

國內一致認為HYCLONE的血清是好的，但是根據我在北美的經(jīng)歷，國外一般認為GIBCO比HYCLONE好，所以并不是價(jià)格決定質(zhì)量，但是總的來(lái)說(shuō)這兩種價(jià)格普遍偏貴，一般不是太嬌氣的細胞，國產(chǎn)的就夠用了。此外，由于國內HYCLONE，GIBCO并沒(méi)有生產(chǎn)線(xiàn)，我們只能從代理商那里買(mǎi)，而代理商又魚(yú)龍混雜，所以買(mǎi)到假貨的可能性也很大。所以，我一般會(huì )從直銷(xiāo)員那里買(mǎi)血清，有的國外生物公司由于剛剛進(jìn)入中國，品牌度不高，但是其實(shí)在國外已經(jīng)做得很不錯了，如Wisent等，他們在國內有辦事處，我會(huì )從那里拿，血清的品質(zhì)和HYCLONE不相上下，但價(jià)格相對優(yōu)惠很多。

4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

(1)解凍血清時(shí)，請隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

(2) 血清分裝凍存時(shí)，須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。

(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì )變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩定的成份也會(huì )因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

　　(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì )造成沉淀物的增多。

5、 培養基中添加了血清和抗生素后，可長(cháng)期保存嗎?

一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解。

6、 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué) 研究，培養ES細胞、平滑肌細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

7、 有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn)，或沒(méi)有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長(cháng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì )使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物 的分裂擴增。

若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!

8、細胞培養 中出現黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?

一旦您在細胞培養的過(guò)程中發(fā)現有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀(guān)察培養基是否混濁，然后，在鏡下觀(guān)察培養細胞生長(cháng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細胞被污染，微生物則會(huì )大量繁殖，培養基就會(huì )迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀(guān)察細胞，生長(cháng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現前相比，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現可能與以下幾種情況有關(guān)：

(1)細胞生長(cháng)過(guò)老，破碎的細胞殘骸;

(2)血清質(zhì)量不好，反復凍融的結果;

(3)配制培養基的pH值偏高，不宜細胞生長(cháng);

(4)配制培養基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱秒x心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn);

(5)培養原代細胞中出現小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

9、 細胞培養中如何防止黑點(diǎn)生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數。

(2) 培養基無(wú)需37℃水浴。

(3) 培養基保持最佳PH值7.0- 7.2。

(4) 嚴格控制配制培養基的水質(zhì)，容器定期刷洗。

(5) 掌握細胞傳代的最佳時(shí)機，細胞切勿生長(cháng)過(guò)老。

10、小牛血清和胎牛血清有何區別與注意事項?

來(lái)源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長(cháng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細胞必需胎牛血清才能生長(cháng)，而有些細胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

血清保存和使用須注意：血清應保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過(guò)一個(gè)月。解凍血清時(shí) ，應先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，絕對不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會(huì )增加，血清在解凍和熱滅活后，應按用量分裝并于-20℃保存，避免反復凍融。

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