小鼠ELISA試劑盒試驗時(shí)的保溫及實(shí)驗注意事項

小鼠ELISA試劑盒試驗時(shí)通過(guò)酶反應將抗原抗體反應信號放大，從而提高了檢測靈敏度，而且還能通過(guò)產(chǎn)生有顏色的底物用儀器或肉眼識別，此法一般在酶聯(lián)板上或膜上進(jìn)行，進(jìn)行一次檢測需要4h左右。

在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后?？乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育，有人稱(chēng)之為孵育，在ELISA中似不恰當。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會(huì )，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過(guò)程，因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點(diǎn)。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時(shí)間的溫育。

溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實(shí)驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達峰值。為加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應4℃更全，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過(guò)夜，以形成最多的沉淀。但因所需時(shí)間太長(cháng)，在ELISA中一般不予采用。

保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均采用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中ELISA板底應貼著(zhù)水面，使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應如此。無(wú)論是水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應，操作時(shí)的室溫應嚴格限制在規定的范圍內，標準室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時(shí)可根據說(shuō)明書(shū)的要求控制溫育。室溫溫育時(shí)，ELISA板只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時(shí)間應按規定力求準確。為保證這一點(diǎn)，一個(gè)人操作時(shí)，一次不宜多于兩塊板同時(shí)測定。

酶聯(lián)免疫試劑盒注意事項：

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2. 濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

3. 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5. 底物請避光保存。

6. 嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

7. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

8. 本試劑不同批號組分不得混用。

9.如需代測或者樣本暫時(shí)不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間避免反復凍融，-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。10.試劑使用須知：

11.(1)請參照相關(guān)法規、文獻、MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進(jìn)行安全操作。

12.(2)通常購買(mǎi)試劑時(shí)一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話(huà)，更加注意其他保管和管理。

13.(3)萬(wàn)一試劑操作者并非專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員。必須在專(zhuān)業(yè)人士的指導監督下進(jìn)行操作。對于使用后的廢棄物，不要或者舊的試劑，應按照相關(guān)法律法規正當處理。

14.(4)購買(mǎi)后，請務(wù)必確認標簽上的注意事項;做好預防顛倒，摔壞的措施和管理體制;在使用前再次確認標簽上的注意事項，做好必要的安全對策;對沒(méi)有標明其危害特性、有害特性的，也要慎重地進(jìn)行操作;必須帶好防護用具，小心翼翼進(jìn)行操作。

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