BUNSEN本生小課堂：白介素ELISA試劑盒結果異常分析

　　白細胞介素，簡(jiǎn)稱(chēng)白介素，是指在白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子，它和血細胞生長(cháng)因子同屬細胞因子。兩者相互協(xié)調，相互作用，共同完成造血和免疫調節功能。白細胞介素在傳遞信息，激活與調節免疫細胞，介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用。

　　白介素ELISA檢測試劑盒兩大問(wèn)題

　　問(wèn)題一：造成白介素ELISA試劑盒結果異常的原因

　　A、試劑盒沒(méi)有按規定進(jìn)行保存，受高溫影響。

　　B、試劑盒、樣品用前未平衡至室溫。

　　C、加入試劑的體積和時(shí)間有誤，移液器計量不準，吸嘴內水分太多或不清潔。

　　D、必須在有效期內使用，超過(guò)有效期的產(chǎn)品可能會(huì )產(chǎn)生很弱的信號。

　　E、孵育時(shí)間及孵育溫度未達到要求，反應板放入培養箱時(shí)注意溫度并及時(shí)調整。

　　F、洗板及加樣過(guò)程中，酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力。

　　G、蒸餾水水質(zhì)有問(wèn)題。

　　H、洗板次數過(guò)多，或濃縮洗液稀釋倍數不符合要求，洗滌沖擊力太大，浸泡時(shí)間太長(cháng)。

　　I、顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入。

　　問(wèn)題二：白介素ELISA試劑盒顯色反響應避光運用

　　白介素ELISA試劑盒目視標本也無(wú)色或近于無(wú)色者判為陰性，顯色明晰者為陽(yáng)性。但在ELSIA試劑盒中，正常人血清反響后?？沙尸F呈色的本底，此本底的深淺因ELISA試劑盒的構成和試驗的條件不一樣而異，因而試驗中有必要加測陰性對照。陰性對照的構成應為不含受檢物的正常血清或類(lèi)似物。在用肉眼判別成果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽(yáng)性的指標。此刻酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時(shí)刻仍是影響顯色的要素。在必定時(shí)刻內，陰性孔可堅持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)刻的延伸而呈色加強。恰當提高溫度有助于加快顯色進(jìn)行。在定量測定中，參加底物后的反響溫度和時(shí)刻應按規則力求。ELISA試劑盒定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)刻通常不需要嚴格控制，有時(shí)可根據陽(yáng)性對照孔和陰性對照孔的顯況恰當縮短或延伸反響時(shí)刻，及時(shí)判別。

　　OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，ELISA試劑盒再延伸反響時(shí)刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì )自行變色，顯色反響結束時(shí)參加停止液停止反響。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。

　　TMB受光照的影響不大，ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺上，邊反響調查成果。但為確保試驗成果的穩定性，宜在規則的恰當時(shí)刻閱覽成果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達頂feng峰，隨即逐步削弱，ELISA試劑盒至2小時(shí)后即可徹di衰退至無(wú)色。TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響停止。這類(lèi)停止劑尚能使藍色維持較長(cháng)時(shí)刻(12-24小時(shí))不褪，是目視判別的杰出停止劑。此外，各類(lèi)酸性停止液則會(huì )使藍色轉變成黃色，此刻可用特定的波長(cháng)(450nm)測讀吸光值。

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