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問(wèn)題解析:ELISA實(shí)驗出現的問(wèn)題及原因分析

更新時(shí)間:2024-03-28    點(diǎn)擊次數:723

  ELISA實(shí)驗出現的問(wèn)題及原因分析


  1、陽(yáng)性對照不顯色

  漏加陽(yáng)性對照

  陽(yáng)性對照孔忘加酶或忘加顯色劑

  陽(yáng)性對照受污染

  2、陽(yáng)性對照顯色淺(HBeAb HBcAb陰性對照顯色淺)

  試劑和保存不當、活性下降

  在使用前試劑盒未放置在室溫平衡

  溫育時(shí)間不夠或孵育溫度過(guò)低

  洗板浸泡時(shí)間過(guò)長(cháng)、洗板次數過(guò)多

  使用不正確的洗液

  洗液中含有防腐劑同時(shí)殘留量過(guò)多

  洗板后酶標板被干透

  讀數時(shí)使用波長(cháng)不正確

  濾光片不清潔或濾光片位置錯誤

  讀數時(shí)酶標板放置位置錯誤

  陽(yáng)性對照活性下降

  酶標失活


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  3、陰性對照顯色(HBeAb、HBcAB除外)

  實(shí)驗過(guò)程受污染

  陰性對照污染

  酶滴在孔壁上

  4、整板不顯色

  試劑和保存不當、已經(jīng)失活

  忘記加酶、可檢查滴瓶?jì)让噶?/p>

  忘記加抗原或中和試劑

  忘記加顯色劑A或顯色劑B

  5、陽(yáng)性對照讀數不正常

  加入標本后未進(jìn)行必要的混勻

  標本稀釋錯誤

  加樣量不正確

  冷凍標本未溶解混勻

  標本中含有防腐劑


638301926585544014489.png


  6、血清本底高

  試劑盒靈敏度高

  加樣時(shí)使用同一槍頭、交叉污染

  孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)或溫度過(guò)高

  洗板次數不足,浸泡時(shí)間短

  洗板時(shí)洗液量少或殘留量多

  洗板時(shí)洗液量過(guò)多、串孔

  洗板機管道中有霉菌生長(cháng)

  洗液瓶混用

  洗板機洗板頭阻塞或洗板機洗板頭位置錯誤

  配置洗液的去離子水或蒸餾水被污染

  終止液濃度不夠,沒(méi)有充分混勻,或終止液被污染

  讀數時(shí)酶標板底部有水蒸氣凝結

  酶標儀偏差

  7、假陽(yáng)性結果

  實(shí)驗器具被污染

  血清中出現纖維蛋白凝集

  血清標本中出現過(guò)多的紅細胞

  血漿標本處理不當

  標本中含有灰塵、顆?;蚣毦?/p>

  標本被反復凍融

  加標本后進(jìn)行不正確的振蕩

  沿孔壁上加入標本,加樣后出現過(guò)多的氣泡

  酶標滴加在孔壁上,洗板未洗凈

  混用洗液或洗液稀釋錯誤

  洗液瓶中、管道或配置洗液的水中有霉菌

  洗板次數不足或浸泡時(shí)間短

  洗板時(shí)洗液量少或殘留量多

  洗板時(shí)洗液量過(guò)多、串孔

  讀數時(shí)酶標板底部有水蒸氣凝結

  洗液瓶、廢液瓶混用

  讀數過(guò)程中板孔中有氣泡

  酶標儀偏差

  8、同一板內重復性差

  標本混勻不充分

  試劑混勻不充分

  標本與酶結合物混勻不充分

  加樣技術(shù)差異

  加樣器故障或加樣器被污染

  加樣時(shí)間過(guò)長(cháng)導致孵育時(shí)間不同

  孵育器內部的溫度不一致,造成酶標板孔間的孵育溫度差異

  讀數時(shí)酶標板孔間有氣泡

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