ELISA試劑盒科研實(shí)驗中的操作技巧與注意事項

　　在Elisa試劑盒檢測實(shí)驗中，包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保留抗原很重要，做重組蛋白時(shí)，要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑，從而排斥Elisa后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時(shí)因為試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包。

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。該法適于測定細胞培養上清、血清、血漿及組織液中的樣本，干擾小可以測到每毫升納克水平的細胞因子(或受體)的水平。

　　操作技巧：

　　1.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

　　2.合理安排檢測量，以免反應板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(cháng)。

　　3.吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

　　4.要盡量做雙孔實(shí)驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。

　　5.樣品稀釋液應用加液器加注，并經(jīng)常校對其準確性。

　　6.為防止樣品蒸發(fā)，試驗時(shí)將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。

　　7.未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過(guò)氧化物酶標記抗人IgG工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過(guò)的辣根過(guò)氧化物酶標記抗人IgG工作液。

　　8.ELISA試劑盒實(shí)驗中，加樣后及時(shí)放人孵箱，標本較多時(shí)，要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長(cháng)，導致非特異性結合緊附于反應孔周?chē)?，難以清洗。

　　9.剩余樣品及廢棄物應經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

　　10.人ELISA試劑盒洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

　　11.每次實(shí)驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是加底物溶液及2N H2SO4。測量時(shí)先用此孔調OD值至零。

　　12.手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。

　　13.對樣本的結果有疑問(wèn)時(shí)需要使用其他檢測方法進(jìn)行驗證。

　　14.沒(méi)有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來(lái)水。

　　15.在使用微量加樣器時(shí)，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。

　　16.吸取液體時(shí)速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，人ELISA試劑盒吸取的量不夠準確。

　　17.吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。

　　注意事項：

　　1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì )有結晶，這屬于正?，F象，水浴加熱使結晶溶解后再使用。

　　2.實(shí)驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。

　　3.嚴格按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

　　4.所有液體組分使用前充分搖勻。

　　按試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求準備實(shí)驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時(shí)放回冰箱保存。

　　試劑盒的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，注意每批的細節。在使用細胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說(shuō)明書(shū)中的細節，將凍干的細胞因子復溶。一般待測抗原標準曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍的可通過(guò)將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml?？衫脴藴实腅LISA操作流程、放大試劑盒、第三類(lèi)試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度，建議孵育標準品和標本。若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物ELISA試劑盒酶的活性。

　　試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內醫學(xué)檢驗一般均用板式點(diǎn)。

　　洗板方法：

　　手工洗板，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實(shí)驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據需要，重復此過(guò)程數次。自動(dòng)洗板，如果有自動(dòng)洗板機，應在熟練使用后再用到正式實(shí)驗過(guò)程中。

　　ELISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。