微量離心管和細胞培養瓶可以高壓蒸汽滅菌嗎

　　微量離心管（EP管）離心管可以高壓滅菌。PP材料的離心管是可以高壓滅菌的。但不要擰的太緊，否則涼下來(lái)會(huì )變形。

　　細胞培養瓶滅菌方法

　　二、濕熱滅菌法 濕熱滅菌法是指利用高溫和高濕度對細胞培養瓶進(jìn)行滅菌的方法。通常使用的設備是高壓滅菌鍋(也稱(chēng)為高壓蒸汽滅菌器)。操作步驟如下:

　　將待滅菌的細胞培養瓶放置在高壓滅菌鍋中,注意瓶蓋朝下放置,以防止水分進(jìn)入瓶?jì)取?/p>

　　加入適量的蒸餾水,使高壓滅菌鍋內保持高濕度。

　　細胞培養的基本知識

　　操作前準備工作:

　　1.玻璃吸管和玻璃培養瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時(shí)以上;

　　2.無(wú)菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈,紫外線(xiàn)照射40分鐘以上;各種培養板照射3小時(shí)以上;

　　3.培養基(pH7.2)和血清配制好后要做無(wú)菌試驗:將血清按10%加入培養基內,用無(wú)菌的玻璃離心管或玻璃瓶取培養基5-10ml置培養箱內培養2-3天,肉眼見(jiàn)無(wú)渾濁或沉淀等異物.分裝后置-20度保存;

　　4.消化液(pH7.8)或其它加入液,應用高壓蒸汽滅菌或一次性無(wú)菌濾器過(guò)濾除菌,分裝成支置-20度保存;

　　5.各種凍存的液體復溫時(shí)應邊搖邊融化,否則有的液體(特別是培養基)容易產(chǎn)生沉淀.

　　6.培養箱應先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外線(xiàn)的應照射1小時(shí)以上,如有高溫滅菌的應按程序來(lái)菌).至少每月一次.

　　7.進(jìn)入操作時(shí)應注意先清洗雙手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作時(shí)注意無(wú)菌臺內空間層次.手及物品不要在暴露的瓶口上方來(lái)往,如果數量較多,培養瓶應放在與酒精燈平行地方便于操作,瓶與瓶之間應相隔一定的距離,開(kāi)瓶(蓋)時(shí)應先用75%酒精反復擦拭或用燈燒,開(kāi)開(kāi)后應用燈先燒口,然后燒蓋.用完后同樣操作.整個(gè)操作過(guò)程盡量在無(wú)菌臺靠里面一點(diǎn).

　　復蘇:

　　1.應遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調至37-37.5度,取出凍存的細胞迅速放入后交細胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化.

　　2.在無(wú)菌臺內將培養基加入50ml的小培養瓶?jì)?約5ml左右,然后用無(wú)菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養并內輕輕搖晃,使細胞均勻后置培養箱內培養.

　　傳代:

　　1.貼壁細胞:

　　對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱.50ml培養瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據配制強度經(jīng)驗),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鐘,鏡下見(jiàn)細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養瓶?jì)?加入培養基后繼續培養或實(shí)驗.

　　2.懸浮細胞:

　　一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶?jì)?加入培養基繼續培養,如要高濃度可先離心500rpm,5min后加入培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶?jì)燃尤肱囵B基繼續培養.

　　無(wú)菌操作

　　簡(jiǎn)要介紹：1.將試驗用品放入超凈工作臺用紫外線(xiàn)照射30分鐘;2. 照射30分鐘后，進(jìn)入緩沖間，換滅菌的無(wú)菌衣，換專(zhuān)用拖鞋;3.手部用5%的潔爾滅浸泡2分鐘，進(jìn)入潔凈區后，用75%的酒精棉球再次擦拭裸露的手部。4.最好戴口罩;5.操作時(shí)盡量靠近火焰;6.裝培養基的瓶子等不要直接口向上，用一個(gè)架子斜放，瓶口朝向火焰;7.標準操作，不要讓無(wú)菌吸管到處碰來(lái)碰去;8.中途出入無(wú)菌室，再次操作時(shí)，一定要再次用75%的酒精棉球消毒。

　　一般來(lái)說(shuō)，如果你培養的細胞是貼壁生長(cháng)的話(huà)，去除舊的培養基后，不管是直接加入新鮮培養基吹打(細胞易脫落)，還是在胰酶消化后用新鮮培養基吹打，都可不用臺盼蘭染色，因為，死的細胞都掉落在舊培養基里，而活的細胞則貼在壁上。如果細胞是懸浮生長(cháng)的，則需要用臺盼蘭染色。不要擔心計數不準，因為你可以將染色液的體積換算回去呀。比如0.1ml細胞懸液加0.1ml臺盼蘭，在EP管內混勻后計數，計數完的細胞數×2不就還原了嗎。你在計數板中看到的亮點(diǎn)就是細胞，當細胞單個(gè)懸浮時(shí)，光的通透性就強一些，而細胞成片貼壁時(shí)，細胞就暗一些，是正常的。

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