本生闡述影響ELISA試劑盒靈敏度出現問(wèn)題及解決辦法

　　ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個(gè)環(huán)節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。BUNSEN本生技術(shù)小編詳解：將操作中各個(gè)環(huán)節常出現問(wèn)題的原因及解決辦法總結一下，以期給同行帶來(lái)—些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。

　　1、超過(guò)有效期。試劑盒必須在有效期內使用，超過(guò)有效期的產(chǎn)品可能會(huì )產(chǎn)生很弱的信號。

　　2、試劑盒沒(méi)有按規定進(jìn)行保存，受高溫影響。

　　3、試劑、樣品用前未平衡至室溫

　　4、加入試劑的體積和時(shí)間有誤，移液器計量不準，吸嘴內水分太多或不清潔。

　　5、洗板及加樣過(guò)程中，酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力，

　　6、孵育時(shí)間及孵育溫度未達到要求，反應板放入培養箱時(shí)注意溫度并及時(shí)調整。

　　7、洗板次數過(guò)多，或濃縮洗液稀釋倍數不符合要求，洗滌沖擊力太大，浸泡時(shí)間太長(cháng)等，

　　8、顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入。

　　9、底物作用時(shí)間不夠，

　　10、燕餾水水質(zhì)有問(wèn)題

　　ELISA試劑盒靈敏度出現問(wèn)題相應的解決方法

　　1、實(shí)驗前檢查試劑的組分及批號，確認試劑未過(guò)期,

　　2、不要將試劑盒長(cháng)時(shí)間置于常溫下，按便用規定儲藏。

　　3、試劑、樣品用前平衡至室溫

　　4、確定所使用的試劑體積正確，加入時(shí)間適當。校正移液器，移液器與吸晚配合要緊密吻合。移液不宣太快，盡量排放完。

　　5、確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如愛(ài)氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗千凈，確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。

　　6、孵育溫度應控制在37-38C，孵育時(shí)間嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作。保溫期內不宜多開(kāi)門(mén)，以免影響保溫。

　　7、嚴格按說(shuō)明書(shū)要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說(shuō)明書(shū)要求置留洗滌液時(shí)間和洗滌次數，

　　8、顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過(guò)快，先加顯色劑A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合。

　　9、準確定時(shí)。

　　10、測定燕餾水配制試劑對酶免疫法的影響。

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