本生帶您了解、胎牛血清凍存和融化的注意事項
 

　　不同于其它常用的實(shí)驗方法，細胞培養是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程。胎牛血清作為細胞培養一個(gè)極為重要的營(yíng)養來(lái)源，所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對于細胞的生長(cháng)產(chǎn)生極大的影響。作為胎牛血清的主要供應商之一，我們經(jīng)常收到焦急的客戶(hù)來(lái)電，稱(chēng)血清出現了什么問(wèn)題。小編將針對血清如何儲存、融化、為何出現沉淀以及如何減少沉淀做出詳細說(shuō)明，旨在幫助客戶(hù)解決血清出現的問(wèn)題。BUNSEN本生胎牛血清

　　血清沉淀：

　　1 血清非人工產(chǎn)品，沉淀出來(lái)系自然現象

　　● 纖維蛋白原(主要)

　　● 鹽析出。如磷酸鈣等

　　● 膽固醇和脂肪酸

　　● 蛋白析出

　　2 沉淀在下列情況下還會(huì )增加:

　　● 血清熱滅活

　　● 37℃培養(常常由此引發(fā)歧異)

　　● 反復凍融

　　● 溶解過(guò)程中沒(méi)有搖勻

　　● 伽馬射線(xiàn)照射

　　● 長(cháng)期存放在2-8°C

　　● 血清加入到 RPMI1640 中時(shí)，沉淀往往會(huì )發(fā)生或增加

　　● pH升高時(shí)，沉淀會(huì )增加

　　● 在培養板或培養皿中，因為培養基的蒸發(fā)也會(huì )導致沉淀的增加

　　3沉淀不會(huì )影響其對細胞的促生長(cháng)作用

　　● 技術(shù)人員對此問(wèn)題有過(guò)深入研究證明

　　● 請注意一個(gè)例外：沉淀影響巨噬細胞的培養

　　4 這種現象發(fā)生在所有的血清中

　　● l網(wǎng)站上說(shuō)“G”品牌的胎牛血清沒(méi)有預老化，如果存放在2-8℃，血清中的各種蛋白或酯類(lèi)有可能會(huì )凝聚析出，出現沉淀或混濁。這種不會(huì )影響血清對細胞的促生長(cháng)作用。我們建議把血清存放在-20℃，并避免反復凍融。

　　● 品牌胎牛血清說(shuō)明書(shū)中說(shuō):“在熔化過(guò)程中混濁多絮狀沉淀，這種現象對多數血清來(lái)說(shuō)是正常的，并不影響其使用質(zhì)量。但它影響血清的外觀(guān)，影響瓶與瓶之間的一致性。BUNSEN本生胎牛血清

　　5 血清并沒(méi)有被污染

　　● 檢測血清是否被污染方法是將血清接種到血酯板上，培養后看是否有菌落形成.

　　● 在1000x顯微鏡下，有經(jīng)驗的微生物學(xué)家通過(guò)觀(guān)察有無(wú)格蘭仕染色的細菌，也可以判斷血清是否被污染

　　如何去除血清中的沉淀?

　　● 如想去除這些絮狀沉淀物，可將血清分裝到無(wú)菌離心管中，以400g離心，上清液即可直接加入到培養液中。

　　● 不要以過(guò)濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為可能阻塞濾膜。

　　血清溶解建議-如何減少沉淀

　　● 將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱12-24小時(shí)左右使之浴解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。

　　● 切勿將剛剛從-20℃冰箱里拿出來(lái)的血清直接放在水浴中，無(wú)論室溫的水或者37℃的水，因為在水浴中血清迅速熔化，很大的溫差(-20℃到37℃，溫差為57℃)極其容易造成血清產(chǎn)生沉淀。

　　● 直接放65℃水浴中更是極其殘忍的做法，是對血清的褻玩，對科學(xué)規則的粗暴踐踏!

　　● 血清應該在-10℃以下保存。若一次無(wú)法用完一瓶，應該無(wú)菌分裝，再冷凍保存。

　　胎牛血清凍存的注意事項：

　　1. 需要長(cháng)期保存的血清有必要儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)刻切勿超過(guò)1個(gè)月。由于血清結冰時(shí)體積會(huì )增加約10%，因而，血清在凍入低溫冰箱前，有必要預留一定體積空間，不然易發(fā)生污染或玻璃瓶?jì)隽选?/p>

　　2. 合規生產(chǎn)企業(yè)供給的血清為無(wú)菌，無(wú)需再過(guò)濾除菌。如發(fā)現血清有懸浮物，則可將血清加入培養液內一起過(guò)濾，切勿直接過(guò)濾器過(guò)濾血清。

　　3. 瓶裝血清凍結需采用逐漸凍結法：-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝，在溶解過(guò)程中需不斷悄悄搖晃均勻(小心勿形成氣泡)，使溫度與成分均一，削減沉積的發(fā)作。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃融化，溫差大的情況下血清容易形成蛋白質(zhì)凝聚而出現沉積和沉淀絮狀物。

　　4. 熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已凍結的血清。加熱過(guò)程中須規矩搖晃均勻。目的是使血清中的補體成分(complement)滅活，除非有必要，一般不建議做此熱處理，因為熱處理會(huì )形成血清沉積增多，而且還會(huì )影響血清的質(zhì)量。補體參與反應有：滑潤肌細胞收縮、肥大細胞和血小板釋放組胺、增強吞噬作用、促進(jìn)淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)作化學(xué)趨化和活化。相關(guān)研究的使用者可以考慮血清增加熱滅活處理。

　　5. 切勿將血清在37℃放置太久或者反復凍融，不然血清會(huì )變得污濁，同時(shí)血清中的有效成分會(huì )破壞而影響血清質(zhì)量。

　　6. 血清融化后的沉淀主要是血清中的脂蛋白變性及凍結后血清中纖維蛋白形成，這些絮狀物不會(huì )影響血清本身的質(zhì)量?？煞盅b至無(wú)菌離心管400g離心去除，也可不用處理直接加入培養基內一起培養。不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會(huì )阻塞您的過(guò)濾膜。

　　7. 顯微鏡下小黑點(diǎn)是由于經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清，沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)增多，有些沉淀物在顯微鏡呈現為黑點(diǎn)，常誤認為血清受污染。

　　胎牛血清本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。