本生闡述：細胞培養板的選擇與常見(jiàn)問(wèn)題解答
 

　　細胞培養板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養孔的孔數有6、12、24、48、96、384、1536  孔等;具體選擇時(shí)根據培養細胞的類(lèi)型、所需培養體積及不同的實(shí)驗目的而定。

　　1)平底和圓底(U型和V型)培養板的區別和選擇：

　　貼壁細胞一般用平底培養板。懸浮型細胞的培養一般用V型。U型培養板亦多用于培養懸浮型細胞 。V型培養板有時(shí)用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗。

　　不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什么類(lèi)型的細胞都可用，但當細胞數目較少，如做克隆時(shí)，就用96孔平底板，另外，做MTT等實(shí)驗時(shí)，無(wú)論貼壁和懸浮細胞，一般均用平底板。

　　至于U或V型板，一般在某些特殊要求時(shí)才使用。如在免疫學(xué)方面，當做兩種不同淋巴細胞混合培養時(shí)，需要二者相互接觸以刺激，因此，一般需要U型板，因細胞會(huì )由于重力的作用而聚集在一個(gè)很小的范圍內。

　　V型板的用途更少，一般用于細胞殺傷實(shí)驗時(shí)，為了使效靶細胞緊密接觸，常使用V型板，但這種試驗也可用U型板替代(加入細胞后，低速離心)如果是養細胞的話(huà)，通常是選用平底的。

 

　　圓底的好像沒(méi)聽(tīng)說(shuō)過(guò)拿來(lái)養細胞。圓底的通常是拿來(lái)做分析， 化學(xué)反應， 或是保存樣品用的， 因為圓底比較好將液體吸得干凈，如果用平底的就不好吸了。不過(guò)，  如果你是要測吸光值的話(huà)，  一定要買(mǎi)平底的才行。大部分細胞培養都用平底培養板，便于鏡下觀(guān)測、有明確的底面積、細胞培養液面高度相對一致，還便于MTT檢測。圓底培養板主要用于同位素摻入的實(shí)驗，需要用細胞收集儀收集細胞的培養，如“混合淋巴細胞培養”等。

　　2)細胞培養常見(jiàn)問(wèn)題與解答

　　問(wèn)：我看到培養板有4、6、12、24、48、96孔幾種規格 ，但不知道到底什么實(shí)驗用哪種規格。

　　答：要根據你具體的實(shí)驗要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，細胞爬片一般用24孔等，要具體根據你實(shí)驗來(lái)定。

　　問(wèn)：我想測吸光度用酶標儀，用多孔細胞培養板行嗎?請問(wèn)酶標板多孔細胞培養板有什么區別?

　　答：用多空細胞培養板測吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來(lái)做樣品的蛋白定量和MTT檢測。

　　區別：酶標板一般要比細胞培養板貴，細胞板主要做細胞培養，但也可以用來(lái)測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應板，一般不能用做細胞培養，它主要做免疫酶聯(lián)反應后的蛋白檢測，它需要更高的要求還需要特定的酶標工作液。

　　常用不同培養板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范圍，結合不同孔的底面積就可算出各培養孔的適宜加液量。若加液量過(guò)多會(huì )影響氣體(氧氣)交換，而且在搬動(dòng)過(guò)程中易溢出造成污染。具體所加細胞密度依實(shí)驗的目的不同靈活掌握。

　　3)細胞培養板的密閉和污染問(wèn)題

　　細胞培養板的加樣和操作：細胞培養板在進(jìn)行細胞操作時(shí)同樣遵循嚴格無(wú)菌的原則，各項操作要規范、科學(xué)，不對細胞的生長(cháng)造成額外的影響。這其中常見(jiàn)的問(wèn)題就是如何加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長(cháng)狀態(tài)的影響。

　　問(wèn)：96，24孔培養板或培養皿的蓋子都很松，這樣是方便了透氣，但是細菌、霉菌等污染物會(huì )不會(huì )也隨著(zhù)溜進(jìn)去呢?

　　答：

　　1. 蓋子很松，屬于半開(kāi)放培養，這樣的目的是透氣(實(shí)際上是為了使培養皿外的co2能夠與培養皿充分交換，維持培養基的pH值)。

　　2.  凡事有利必有弊，這樣當然增加了污染的可能性。此外這樣還會(huì )使培養皿內的液體蒸發(fā)，這對于定量的藥物來(lái)說(shuō)就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的：

　　a 培養箱內空氣必須清潔(定期紫外線(xiàn)照，酒精擦洗，盡量少開(kāi)關(guān)培養箱);

　　b 培養箱內的濕度必須始終保持為100%(培養箱內放置無(wú)菌蒸餾水的水槽)。

　　就好像培養皿，也是一個(gè)蓋倒扣的容器，也不會(huì )污染。主要是因為蓋子“L”型邊緣產(chǎn)生氣流負壓的緣故，灰塵上面才附著(zhù)有微生物，而氣流攜帶的灰塵是無(wú)法通過(guò)產(chǎn)生負壓的蓋邊緣的。而透氣作用只是通過(guò)空氣的擴散，不會(huì )產(chǎn)生氣流，所以只會(huì )透氣不會(huì )透菌。

　　問(wèn)：我使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超凈臺內)，而其它孔中還有細胞要培養，我很擔心這樣會(huì )污染，不知道要注意什么?大家不知道有什么好的建議。

　　答：在超凈臺內如果操作規范的話(huà)應該可以的，我想你可以充分利用培養版的蓋子，盡量只暴露要操作的孔，將其它孔用蓋子蓋起來(lái)。這是我的一點(diǎn)粗淺的見(jiàn)解，拋磚引玉吧!

　　4)細胞分布不均及解決辦法

　　問(wèn)：我的細胞接種培養板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊?我看園子里有的戰友的細胞卻是聚集在中間，是不是板子的質(zhì)量問(wèn)題啊?

　　答：請問(wèn)你的細胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養板?如果是后者，而且是轉圈搖勻的話(huà)，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導致細胞中間少，四周多!自己可是試試!

　　周邊一般是相對會(huì )多一點(diǎn)，但是中間的數量也不會(huì )很少啊~~ 鋪板的時(shí)候我也沒(méi)有特異去振蕩培養板。

　　一個(gè)好辦法：在你培養種板之，把培養板放入培養箱里進(jìn)行幾個(gè)小時(shí)的飽和后再取出，種入細胞時(shí)力量要輕，可采取用滴頭在培養板孔的側面慢慢加入讓細胞懸液流入板孔中，培養的細胞基本是均勻生長(cháng)。記住千萬(wàn)不要用振蕩器振蕩，否則你的細胞就會(huì )想你說(shuō)得那樣聚積在一起。

　　5)6孔板接種和換液?jiǎn)?wèn)題：

　　問(wèn)：我的細胞傳代很正常，但一種到六孔板里(不管加藥和對照)，總有兩三個(gè)孔(隨機)細胞長(cháng)得不好，很小，像破碎了。有人遇到過(guò)這種情況嗎?到底是啥原因呢?請各位指點(diǎn)

　　答：可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細胞剛剛拿出來(lái)?yè)Q液加液，培養基也是從4度冰箱拿出來(lái)不久，很容易細胞就會(huì )凍死了。建議你把培養基先在培養箱里邊孵育15min先。

　　6)24孔板接種問(wèn)題：

　　問(wèn)：把細胞消化接種到24孔板之后，已經(jīng)四天了，老是每孔的中間部分長(cháng)不滿(mǎn)，每天換液時(shí)都用PBS  清洗，第二天換液時(shí)都出現同樣的情況，每孔的邊緣長(cháng)的很好，中央大量死細胞?我是選擇孔內鋪蓋玻片，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗，必要的步驟嗎?另外，也有可能和細胞種類(lèi)有關(guān)或者和培養液有關(guān)?

　　答：1.  我想你的培養液可能加的太少了。由于表面張力的作用，培養板的邊緣液體會(huì )向上走，造成培養液面呈現一個(gè)凹面(就像量筒的液體凹面一樣)，中央的細胞正好在凹面的處，培養液少，細胞的營(yíng)養不夠，甚至干涸掉，空氣中的氧氣也會(huì )造成損傷，即使有增值過(guò)來(lái)的細胞也會(huì )死掉。

　　細胞培養板本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。