人活性氧 (ROS) 酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

  本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：0.3ng/mL - 8ng/mL

  規格：96T  48T 

  貨號：BS-9689-A   BS-9689-B

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中活性氧 (ROS) 含量。

實(shí)驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人活性氧(ROS)水平。用純化的人活性氧(ROS) 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入活性氧 (ROS)，再與 HRP  標記的活性氧 (ROS) 抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏 色的深淺和樣品中的活性氧 (ROS) 呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm波長(cháng)下測定吸光度 (OD  值)，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中人活性氧 (ROS) 濃度。

試劑盒組成：

標本要求：

1 ．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能 馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的 (HRP) 活性。

操作步驟：

1.     標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。

2.     加樣：分別設空白孔 (空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，

然后再加待測樣品 10μl  (樣品最終稀釋度為 5 倍) 。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.     溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.     配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.     加酶：每孔加入酶標試劑 50μl ，空白孔除外。

7.     溫育：操作同 3。

8.     洗滌：操作同 5。

9.     顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl ，再加入顯色劑 B50μl ，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10.   終止：每孔加終止液 50μl ，終止反應 (此時(shí)藍色立轉黃色)。

11.   測定：以空白孔調零，450nm 波長(cháng)依序測量各孔的吸光度 (OD 值) 。  測定應在加終止

液后 15 分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

操作程序總結：

計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的 OD 值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標 準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項

1 ．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。

     2 ．濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

3 ．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間最好 控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4 ．  請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高 (樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數 (n 倍) 后再測定，計 算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數 ( ×n×5)。

    5 ．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6 ．底物請避光保存。

   7 ．嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

   8 ．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9 ．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1 ．試劑盒保存：；2-8℃。

2 ．有效期：6 個(gè)月

   人活性氧 (ROS) 酶聯(lián)免疫分析試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。