Elisa實(shí)驗:elisa原理及實(shí)驗前注意事項

　　elisa試劑盒實(shí)驗前注意事項：

　　一、操作前應對實(shí)驗的物理參數有充分的了解，如環(huán)境溫度(保持在18 C～25℃)、反應孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數等，要先查看水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。

　　二、正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺，血清殘留在反應孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致，否則可導致結果錯誤，實(shí)驗重復性差。

　　三、手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗滌次數不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數，洗液在反應孑L內滯留的時(shí)間不宜太長(cháng)。不要使洗液在孑L間竄流，造成孔問(wèn)污染，導致假陰性或假陽(yáng)性。

　　四、要保證加液量一致 我們在使用時(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準，造成顯色不統一，判斷錯誤。

　　五、顯色液量不可過(guò)多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下，加顯色系統后要避光反應，顯色液量不能過(guò)多，以免顯色過(guò)強。

　　elisa實(shí)驗的原理：

　　ELISA實(shí)驗原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結合，此種結合不會(huì )改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色氧化型，出現顏色反應。

　　因此，可通過(guò)底物的顏色反應來(lái)判定有無(wú)相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過(guò)ELISA檢測儀進(jìn)行定量測定，這樣就將酶化學(xué)反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來(lái)，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

　　擴展資料：

　　ELISA實(shí)驗基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。

　　ELISA方法已被廣泛應用于多種細菌和病毒等疾病的診斷。在動(dòng)物檢疫方面，ELISA在豬傳染性胃腸炎、牛副結核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽狂犬病、藍舌病等的診斷中已為廣泛采用的標準方法。

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