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一、細胞培養基發(fā)展歷史
細胞體外培養初期使用的培養基,都是天然培養基,也就是組織提取物或者體液,如血漿、血清、淋巴液、胚胎浸出液等,直到20世紀50年代Parke、Eagle等人,設計出化學(xué)成分明確的合成培養基:MEM培養基和DMEM培養基,這兩種培養基直到現在還被人們廣泛使用。在此基礎上,科學(xué)家們發(fā)現,在合成培養基中添加血清,可以使細胞維持更高的活細胞密度和更長(cháng)的培養時(shí)間。隨著(zhù)血清成分的不斷明確,科學(xué)家們逐步開(kāi)始研發(fā)無(wú)血清培養基,減少血清對細胞培養的影響。
二、細胞培養基組成成分及功能
1、氨基酸
氨基酸是培養基中主要的氮源物質(zhì),也是重要的能源物質(zhì)。
2、維生素
一般培養基中含有的維生素有:①脂溶性維生素:如A、D、E、K等;②水溶性維生素:如B、C、葉酸、煙酰胺等。培養基中添加維生素可以適合更多細胞系的生長(cháng)。
3、無(wú)機鹽
無(wú)機鹽是維持培養基滲透壓平衡的主要物質(zhì),它還可以調節細胞膜功能,無(wú)機鹽主要包括:Ca2+、Mg2+、Cl-、Na+、K+等。
4、碳水化合物
細胞培養基中的碳水化合物通常被用作細胞的能量來(lái)源,常用的有葡萄糖、丙酮酸鈉等。
5、脂類(lèi)
脂類(lèi)物質(zhì)作為有機能量的來(lái)源,可以滿(mǎn)足細胞新陳代謝的需求,也可以支持細胞生長(cháng)和存活,培養基中的脂類(lèi)物質(zhì)主要有:膽固醇、乙醇胺、亞油酸等。
6、激素
激素類(lèi)物質(zhì)主要包含:胰島素、生長(cháng)激素、腎上腺素等,可以促進(jìn)細胞生長(cháng)、提高細胞增殖能力,
7、微量元素
細胞培養基中微量元素主要有:銅、錳、鋅、硒等,這些微量元素對細胞無(wú)蛋白長(cháng)期穩定培養具有重要作用。
8、特殊添加物
蛋白水解物、酵母水解物等這些特殊添加物可以起到抗氧化劑、抗剪切劑、刺激抗體表達等作用。
9、緩沖體系
通常細胞培養基中會(huì )添加HEPES、磷酸鹽等緩沖物質(zhì),可以調節培養基pH、滲透壓等。
三、培養基種類(lèi)
1、BME細胞培養基:適用于各種傳代細胞系。
2、MEM細胞培養基:適合多種細胞單層生長(cháng)。
3、DMEM細胞培養基:根據葡萄糖含量可以分為低糖和高糖2種類(lèi)型,低糖適用于培養貼壁依賴(lài)性細胞,高糖適用于高密度懸浮細胞培養。
4、DMEM/F12細胞培養基:適用于原代細胞培養及難培養細胞。
5、M199細胞培養基:適用于培養多種種屬來(lái)源的細胞及能轉染的細胞。
6、IMDM細胞培養基:適用于高密度細胞的快速增殖培養。
7、RPMI-1640細胞培養基:適用于懸浮細胞、淋巴細胞等細胞培養。
8、HamF10細胞培養基:適用于克隆化培養。
9、McCoy5A細胞培養基:適用于原代細胞培養、淋巴細胞培養以及一些難培養的細胞。
10、L15細胞培養基:適用于快速增殖的腫瘤細胞培養。
四、培養基保存方法
1、液體培養基
液體培養基應于2-8℃冰箱保存,實(shí)驗前放入37℃預熱。
2、干粉培養基
2-8℃冰箱避光保存。
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