ELISA操作要點(diǎn)：ELISA加樣技巧您了解多少!

　　那在ELISA實(shí)驗中，加樣 一定是繞不開(kāi)的一環(huán)!ELISA測定操作非常簡(jiǎn)單，一般涉及到樣本的收集保存、試劑準備、加樣、溫育、洗板、顯色、結果判斷和結果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當都會(huì )影響測定結果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。

　　ELISA實(shí)驗中一般需要 4 次加樣，即加樣本、加檢測抗體、加底物和加終止液。

　　● 實(shí)驗室使用的微量加樣器應注意保養并定期校正。ELISA比較敏感，每孔加入液體量誤差會(huì )導致最后讀數差別，因此避免儀器帶來(lái)誤差。

　　● 加樣前，溶液充分混勻，加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體，否則會(huì )導致液體殘留在吸頭上，加樣不準確。正確加樣方法應為45度，吸頭貼著(zhù)孔壁和液面的交界處加入。

　　● 加樣品時(shí)，單孔用量要求：≥50ul/指標，如需要做復孔則所需樣本量≥100ul/指標。如果樣本量不充足，具體用量可咨詢(xún)您的專(zhuān)屬銷(xiāo)售。

　　● 加樣時(shí)速度不可過(guò)快，否則無(wú)法保證微量加樣的準確性和均一性。

　　● 加樣時(shí)避免液體濺出，如有樣本濺出，應用吸水紙輕輕拭干，并做相應記錄。

　　● 每次加樣順序一致，尤其底物、終止液順序一致，保證每個(gè)孔顯色時(shí)間相同。

　　● 加完顯色液后，放入一個(gè)可推拉的抽屜內，就可以避光振蕩了。

　　加樣防錯小竅門(mén)

　　● 用一張寫(xiě)滿(mǎn)字的紙，字越多越好，比如報紙，墊在下面，這樣，加過(guò)標本的小孔看過(guò)去下面的字會(huì )變小，沒(méi)加的字正常，非常容易區分。

　　● 可以利用液面反光與沒(méi)有加的孔加以區別。

　　(以下問(wèn)題可能因多種原因引起，本文僅討論加樣的解決方法)

　　Q： 同一個(gè)樣本間的各個(gè)復孔的讀數有顯著(zhù)性差異?

　　A： 加樣量多少不一，操作時(shí)間長(cháng)短不一。重復同一樣本時(shí)，加樣量與加樣時(shí)間理應相同，同時(shí)也應注意移液器的校準。加樣后可輕微晃動(dòng)酶標板使反應液充分混合。

　　Q： 陽(yáng)性對照讀數不正常?

　　A： 加樣量不正確。應保持每次加樣的步驟不要有太大的差異，有條件的應該考慮使用排槍。

　　Q： 血清本底高?

　　A： 加樣時(shí)使用同一槍頭、交叉污染。每次吸樣注意更換吸頭，做到一樣一吸頭，避免交叉污染。

　　Q： 實(shí)驗的標準曲線(xiàn)和測定的重復性差?

　　A： 1. 可能原因：加樣本及試劑量不準;孔間不一致;校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密;重復某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與第一次接近;重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性;樣品稀釋前應充分混勻。

　　2. 可能原因：加樣過(guò)快，孔間發(fā)生污染;重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性;加樣不要過(guò)快。

　　3. 可能原因：加錯樣本;檢查記錄和試劑，是否加錯樣本。

　　4. 可能原因：加樣本及試劑時(shí)，加在孔壁上部非包被區;加樣槍頭不要貼壁。

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