ELISA實(shí)驗中需注意事項及操作步驟!
ELISA試劑盒實(shí)驗中出現各種問(wèn)題,如果能提前知道一些關(guān)于elisa實(shí)驗的要領(lǐng)就可以正確的避免這些問(wèn)題的出現,BUNSEN本生總結問(wèn)題:
1、要保證移液槍的準確性,誤差不能超過(guò)2%??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但有專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標準品時(shí)。
3、要在實(shí)驗前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。
4、ELISA試劑盒實(shí)驗時(shí),要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時(shí),避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(huì )自然流下去。
8、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動(dòng)功能。
9、應盡量做雙孔實(shí)驗,這樣才能保證數據的準確性。
10、ELISA試劑盒對結果有疑問(wèn)的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。
在ELISA試劑盒中通常有3次加樣步聚,即加標本,加酶物,加底物。加樣時(shí)應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留意不行濺起,不行發(fā)作氣泡。加標本通常用微量加樣器,按規則的量參加板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以發(fā)作穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清,可在試管中按規則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,再在其參加血清標本,然后在微型震動(dòng)器上震動(dòng)1分鐘以保證混和。加酶物使用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液進(jìn)程迅速完結。在雙抗體夾心法測定抗原時(shí),如使用對于抗原分子上兩個(gè)不一樣抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體。
ELISA試劑盒則在測守時(shí)可使標本的參加和酶標抗體的參加兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步不光簡(jiǎn)化了操作,縮短了反應時(shí)間,如使用高親和力的單克隆抗體,測定的敏感性和特異性也明顯進(jìn)步。單克隆抗體的使用使測定抗原的ELISA試劑盒進(jìn)步到新水平。
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