小鼠雙鏈RNA(dsRNA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

　　本試劑盒僅供研究使用。

　　小鼠雙鏈RNA(dsRNA)試劑盒檢測范圍：

　　96T

　　3ng/L -180ng/L

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中雙鏈 RNA(dsRNA)含量。

　　實(shí)驗原理

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠雙鏈 RNA(dsRNA)水平。用純化的雙鏈RNA(dsRNA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入雙鏈 RNA(dsRNA)，再與 HRP 標記的抗體結合，形成抗體-抗原-抗體復合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底

　　物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雙鏈 RNA(dsRNA)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值)，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中小鼠雙鏈 RNA(dsRNA)濃度。

　　試劑盒組成

　　1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

　　2 酶標試劑 6ml×1 瓶

　　8 標準品(320ng/L) 0.5ml×1 瓶

　　3 酶標包被板 12 孔×8 條

　　9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

　　4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

　　10 說(shuō)明書(shū) 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶

　　11 封板膜 2 張 6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶

　　12 密封袋 1 個(gè)

　　標本要求

　　1.標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

　　2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步驟

　　1. 標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

　　160ng/L

　　5 號標準品

　　150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　80ng/L

　　4 號標準品

　　150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　40ng/L

　　3 號標準品

　　150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　20ng/L

　　2 號標準品

　　150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　10ng/L

　　1 號標準品

　　150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

　　4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同 3。

　　8. 洗滌：操作同 5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

　　10 分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。

　　11. 測定：以空白孔調零，450nm 波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

　　操作程序總結：

　　計算

　　以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的 OD 值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。

　　小鼠雙鏈RNA(dsRNA)試劑盒注意事項

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 1 小時(shí)后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完， 板條應裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

　　3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間最好 控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

　　4. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定，計 算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6 個(gè)月

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