本生帶您了解冷凍管的使用要點(diǎn)

　　冷凍管的安全使用建議：

　　1.使用低溫恒溫器儲存樣品時(shí)，嚴格要求低溫恒溫器應儲存在液氮的氣相中或冰箱中!如果將冷凍管保存在液氮中，液氮會(huì )以一定概率滲入冷凍管內，復蘇時(shí)由于液氮氣化，管內外壓力不平衡，容易造成冷凍管爆裂，具有生物危害性。

　　冷凍管的安全使用建議：

　　1.使用低溫恒溫器儲存樣品時(shí)，嚴格要求低溫恒溫器應儲存在液氮的氣相中或冰箱中!如果將冷凍管保存在液氮中，液氮會(huì )以一定概率滲入冷凍管內，復蘇時(shí)由于液氮氣化，管內外壓力不平衡，容易造成冷凍管爆裂，具有生物危害性。

　　2.操作冷凍管復蘇，全程使用安全防護設備。建議穿實(shí)驗服，戴棉手套，在安全的實(shí)驗臺上操作。如有可能，請佩戴護目鏡或防護面罩。請格外小心，因為夏天的室內溫度會(huì )比冬天高。

　　3.冷凍管廠(chǎng)家認為在冷凍保存細胞的儲存過(guò)程中，冷凍管的冷凍溫度需要均勻。凍結不均勻會(huì )導致冰塞的產(chǎn)生，冰塞會(huì )壓制兩側液體的溫度傳遞，進(jìn)而產(chǎn)生危險的高壓，損壞冷凍管。

　　4.冷凍樣本量不應超過(guò)冷凍儲存管所需的工作體積。

　　冷凍管廠(chǎng)家認為細胞的冷凍保存過(guò)程;

　　1.用預熱的PBS沖洗細胞。棄去PBS后，加入含有EDTA的胰蛋白酶消化液消化細胞(消化液可以薄薄地覆蓋細胞表面，消化液的濃度要根據不同的細胞系進(jìn)行調整)。

　　2.在37度的消化細胞3-5分鐘，不要過(guò)度消化。

　　3.一旦細胞從底部分離出來(lái)，可以用含血清的培養基停止消化，用吸管輕輕吹氣，細胞就可以重新懸浮。

　　4.冷凍管廠(chǎng)家認為離心細胞再懸浮以沉淀細胞，棄去上清液，并用含血清的培養基再懸浮細胞沉淀。

　　5.計數細胞(建議使用紐鮑爾室)。

　　6.離心(500 g，5分鐘)細胞再懸浮并丟棄上清液。用適當體積的含血清培養基懸浮細胞。

　　7.將細胞重懸液與冷凍保存液(60%培養基，20%流式細胞儀，20%二甲基亞砜)以1，333，601的比例混合，然后轉移到冷凍管中。冷凍試管中的細胞濃度應為15106個(gè)細胞/毫升。

　　8.冷凍管廠(chǎng)家認為含有細胞的冷凍管應以1 K/min的冷卻速度冷凍。上述要求可通過(guò)將冷凍管插入裝有異丙醇的冷凍箱室中，并將其放入70的冰箱中來(lái)實(shí)現。如果冷凍溶液中有其他類(lèi)型的樣品，冷凍管應直接在20、70或液氮的氣相中冷凍。為了保證每個(gè)樣品的冷凍效果均勻，4毫升和5毫升的Cryo.s管需要在20冷凍過(guò)夜，然后轉移到70或液氮的氣體層。

　　9.然后將冷凍儲存管轉移到液氮罐中。為了避免污染(如支原體)并考慮安全預防措施的要求，建議將Cryo.s冷凍管放置在液氮上方的氣體層中，而不是液氮層中。

　　冷凍管廠(chǎng)家認為細胞復蘇過(guò)程：

　　1.從液氮罐中取出冷凍管后，立即放入37的水浴中解凍，解凍時(shí)間約為1-2分鐘。解凍時(shí)，需要不斷搖動(dòng)冷凍管，使其盡快融化。這一步解凍過(guò)程越快越好。

　　2.冷凍管廠(chǎng)家認為將解凍后的細胞懸液轉移到15 ml離心管中，需要立即加入一定量的含血清培養基進(jìn)行混合。

　　3.離心(500 g，5分鐘)細胞再懸浮并丟棄上清液。用適當體積的含血清培養基重新懸浮細胞沉淀，然后將其分裝到一個(gè)或多個(gè)細胞培養瓶中。

　　4.請遵循細胞接種的推薦濃度。

　　5.在接下來(lái)的12小時(shí)內，細胞需要在靜止狀態(tài)下培養。

　　6.冷凍管廠(chǎng)家認為細胞更換可在24-48小時(shí)后進(jìn)行。

　　冷凍管 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。