豬ELISA試劑盒試驗注意事項要點(diǎn)

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　　本生提醒：ELISA實(shí)驗前的注意事項

　　1、仔細閱讀說(shuō)明書(shū)

　　2、確定試劑盒在有效期內

　　3、按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全(數量、體積)

　　4、標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個(gè)復孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內無(wú)法實(shí)驗者，注意低溫保存

　　5、準備好所有實(shí)驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等

　　6、根據檢測標本數量確定所需試劑的量

　　7、按說(shuō)明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑

　　ELISA試驗時(shí)，注意事項如下：

　　1.正式試驗時(shí)，應分別以陽(yáng)性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實(shí)驗結果的準確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

　　2.在ELISA中，進(jìn)行各項實(shí)驗條件的選擇是很重要的，其中包括：

　　(1)固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗條件下進(jìn)行反應，觀(guān)察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

　　(2)包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相同時(shí)，觀(guān)察陽(yáng)性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml。

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