本生—ELISA檢測的原理及方法

　　酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結合專(zhuān)一性進(jìn)行免疫反應的定性和定量檢測方法。它是應用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA試劑盒(ELISAKits)已成為藥物和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具，是檢測組織提取液、血清和細胞培養液中目標抗體/抗原的理想工具，也是重要的質(zhì)量控制手段。

　　1.主要實(shí)驗原理：

　　包被：抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面，原因是蛋白質(zhì)和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原抗體反應等免疫活性;

　　標記：抗原或者抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點(diǎn);

　　顯色：酶結合物與相應包被在固相載體的抗原或者抗體結合后，也被固定在固相載體上，加入酶的底物之后可出現顯色反應，根據反應的顏色深淺可計算抗原或者抗體的相對含量。

　　2.ELISA檢測的方法：

　　雙抗夾心法

　　雙抗夾心法常用于抗原、蛋白等檢測。因為靶標夾在包被在孔上的捕獲抗體和檢測抗體之間，故稱(chēng)之為雙抗夾心法。一般分為：雙抗體夾心法和雙抗原夾心法，前者用于檢測抗原，后者用于檢測抗體。與間接法相比，具有*的靈敏度和特異性。主要針對至少2個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原。

　　臨床上具有2個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原有很多，比較常見(jiàn)有HBsAg、AFP、HCG等大分子抗原。檢測步驟為：先將純化的相應抗體包被在固相載體上，再加入待測樣品，若其中含有待測抗原就會(huì )與固相抗體結合，洗掉雜質(zhì)后，再加入酶標記的檢測抗體進(jìn)行反應，洗掉多余的酶標抗體后，加入底物顯色，顯色與否以及顏色的深淺就代表了待測抗原是否存在以及相對含量。

　　競爭法

　　競爭法ELISA一般用于檢測小分子抗原。小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，無(wú)法同時(shí)與兩種抗體結合因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，故可以采用競爭法模式。一般常用于小分子、lgA、lgG、lgM等檢測。該技術(shù)測抗原的原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，最后的顯色也愈淺。

　　間接法

　　是檢測抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗常用也簡(jiǎn)單的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相抗原結合的受檢抗體，故稱(chēng)為間接法。間接法具有一些特點(diǎn)：1.酶標記抗抗體可選擇性檢測抗體的亞型，可用于鑒別感染時(shí)期;2.酶標抗抗體檢測抗體特異性不高，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。臨床上常用該方法檢測抗HCV抗體、抗HEV抗體、抗CMV抗體、抗HSV抗體、抗沙眼衣原體抗體等。

　　3.應用范圍：

　　ELISA檢測內容：

　　大分子(多肽等)、小分子(農藥、抗生素、代謝產(chǎn)物等)

　　動(dòng)植物病害檢測

　　血清蛋白濃度

　　醫療診斷

　　食品安全診斷

　　本生ELISA檢測 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。