天津本生—DMEM(低糖)的注意事項和使用步驟

　　DMEM培養基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養基，是在MEM培養基的基礎上研制的。

　　與MEM比較增加了各種成分的用量，同時(shí)又分為高糖型(低于4500gm/L)和低糖型(低于1000mg/L)。

　　DMEM低糖培養基用于養干細胞可防分化，DMEM高糖可養大多數哺乳動(dòng)物的細胞。

　　注意事項：

　　1、培養及長(cháng)期放置，需要2-8℃避光保存，請勿低溫凍存。

　　2、培養基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不穩定、易分解，長(cháng)期放置后使用若發(fā)現細胞生長(cháng)變慢可以在使用前加入適量的L-谷氨酰胺，來(lái)維持細胞正常代謝。

　　3、含有NaHCO3的培養基開(kāi)瓶次數較多后培養基內的CO2會(huì )逐漸溢出，PH值上升，培養基的顏色會(huì )偏紫色。

　　培養基偏堿性會(huì )造成細胞生長(cháng)停滯或死亡，建議分裝成小瓶使用或用HEPES調整至正常PH范圍。

　　　DMEM(低糖)使用步驟：

　　1、準確稱(chēng)量試劑：根據不同菌類(lèi)的用途，選擇適宜的培養基，培養基所需試劑必須純凈。

　　2、校正PH值：將稱(chēng)量好的培養基各種成分放入容器內，標記劃線(xiàn)、加熱溶解、補充水分、測定酸堿度，常用PH6.8-8.0的精密試紙或酸度計測定。

　　用1NNaOH和1NHCI調節PH值到適宜范圍內。

　　3、過(guò)濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用DMEM低糖紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養基倒入其中過(guò)濾至透明。

　　4、分裝：將過(guò)濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶?jì)?，塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準備滅菌?/p>

　　5、滅菌：培養基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。

　　一般微生物的營(yíng)養細胞在水中煮沸后即被殺死，但細菌的芽孢有較強的抗熱性，需經(jīng)高壓蒸氣滅菌才能達到滅菌的目的。

　　根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。

　　因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。

　　而在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因為蒸汽的穿透力強，殺菌效果好。

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