牛血清實(shí)驗中常見(jiàn)的問(wèn)題解析!

　　胎牛血清通常在細胞培養中作為基礎生長(cháng)培養基的添加劑，在細胞培養中，血清供應了豐富的高分子蛋白，低分子量營(yíng)養物，疏水載體蛋白和其他體外細胞生長(cháng)必要的成分如激素和粘附因子。同時(shí)，胎牛血清可以增加培養基的緩沖能力或中和有毒成分，起到保護細胞的作用。在細胞培養過(guò)程中是否選擇添加血清，主要根據基礎培養基化學(xué)成分，培養細胞的類(lèi)型和培養體系而定。天津本生小編給大家分享的是牛血清實(shí)驗中常見(jiàn)的問(wèn)題解析!搬起小板凳快來(lái)圍觀(guān)吧!

　　血清實(shí)驗中常見(jiàn)的問(wèn)題解析：

　　一、 如何儲存和解凍血清才不會(huì )使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

　　將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。

　　長(cháng)時(shí)間儲存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。

　　建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。

　　二、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

　　沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會(huì )影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因為沉淀會(huì )堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì )再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì )自然消失。

　　三、 培養基中添加了血清和抗生素后，可保存嗎?

　　一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解。

　　四、 為什么要熱滅活血清?

　　加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)  研究，培養ES細胞、平滑肌細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

　　五、 有必要做熱滅活嗎?

　　實(shí)驗顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn)，或沒(méi)有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長(cháng)速率的降低。

　　而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察，像是“小黑點(diǎn)"，常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì )使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物  的分裂擴增。

　　非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!

　　六、細胞培養 中出現黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?

　　一旦您在細胞培養的過(guò)程中發(fā)現有黑點(diǎn)生成，先，要肉眼觀(guān)察培養基是否混濁，然后，在鏡下觀(guān)察培養細胞生長(cháng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細胞被污染，微生物則會(huì )大量繁殖，培養基就會(huì )迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

　　七、小牛血清和胎牛血清有何區別與注意事項?

　　來(lái)源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS)  是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

　　組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長(cháng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細胞必需胎牛血清才能生長(cháng)，而有些細胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

　　血清保存和使用須注意：血清應保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過(guò)一個(gè)月。

　　解凍血清時(shí)  ，應先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，絕對不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會(huì )增加，血清在解凍和熱滅活后，應按用量分裝并于-20℃保存，避免反復凍融。

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