猴白介素4(IL-4)ELISA試劑盒操作步驟及樣本處理

　　猴白介素4(IL-4)操作步驟：

　　1.加入50ul標準品(Standards)、血清標本于相應反應板孔中。

　　2.每孔加入100ul酶聯(lián)物(Conjugate)，輕輕混勻30秒(重要)，室溫60分鐘。

　　3.洗板：甩盡板內液體，用蒸餾水或者洗滌液(普通洗滌液，自配)洗滌反應板，并去除 水滴(在厚疊吸水紙上拍干);這樣反復洗滌5次。

　　4.每孔加入100ul顯色液，輕輕混勻10秒，室溫20分鐘。

　　5.每孔加入50ul終止液(StopSolution)。輕輕混勻30秒;30分鐘內在450nm處讀OD值。elisa試劑盒

　　樣本處理及要求：

　　1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。

　　2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次離心。

　　3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

　　4.,細胞培養上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　5.組織標本：切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

　　6.標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

　　7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

　　猴白介素4(IL-4)ELISA試劑盒注意事項：

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

　　3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

　　4.請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定，計算時(shí)請乘以總稀釋倍數(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準。

　　猴白介素4(IL-4)ELISA試劑盒操作步驟，本生生物小編就分享到這了，看完本文您就應該有了基本的認識和了解相信大家都明白了吧!總的來(lái)說(shuō)，希望對大家有所幫助。